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关于内毒素检测,你需要知道的那些事!

点击次数:100  发布时间:2020-08-28

  

 

什么是细菌内毒素?

细菌内毒素系指细菌的死体或细菌代谢物,细菌内毒素的主要成分是产生革兰素阴性菌细胞外壁层的脂多糖类物质,其活性主要源于其结构中的类脂A。细菌内毒素广泛存在于自然界中,各种细菌的内毒素大致相同,可以引发热,微循环障碍,内毒素休克及播散性血管内凝血等。因此,生物制品类,注射用药剂,抗生素疫苗类等制剂以及医疗器材类必须经过细菌内毒素检测试验,合格后才能使用。

 

内毒素的生物学活性 

内毒素对机体可产生致病作用 ,它作为外源性 致 热 原作 用 于 粒 细 胞 和 单 核 细 胞 等 ,使 之 释 放 内源性致热原 ,引起发热;它可激活血管活性物质的释放 ,使末梢血管扩张,通透性增高 ,静脉回流减少,心脏输出量减低 ,导致低血压并发生休克;因组织供血不足缺氧,导致代谢性酸中毒;同时,它可活化凝血因子Ⅻ ,导致弥漫性血管内凝血 (dissemina— tedintravascularcoagulation,DIC);此 外 内毒 素 还 可 引起 施 瓦 兹 曼 现 象 (Shwartzmanphenomenon)。另 一 方 面 它 又 可 发 挥 诸 多对机体有益的生物学活性 ,适 量的 内毒素可增强机体 非特 异性免疫的作用,能够抗感染 、抗辐射 ,并能够增强 网状 内皮细 胞 的 活 力 ,并 具 有使 肿瘤 坏 死 消 退 的 活 性 。

 

内毒素检测技术的现状

目前 较 为常 用 的 内 毒 素 检 测 方 法 多基 于 LAL 测 定 之 上 。鲎 是 一 种 海 洋 生 物 ,其 血 细 胞 内含 有 对 内毒 极 其 敏 感 的凝 血 系 统 ,鲎试 验 是 根 据 鲎 血 提 取 液 能被 皮 克 (pg)水平 的 内 毒 素 凝 胶 化 的原理 ,通过检测凝胶的形成来检测 内毒 素。我国药典 规定 的 细 菌 内毒 素 定 量 测 定 法 为 浊 度 法 (TurbidimetricTechnique) 和 显 色 法,除 此 之 外 内毒 素 检 测 还 有 凝 胶 法 。

 

                                                     1 凝 胶 法   

本方 法主 要是待 检 样 品和 鲎试剂 各 0.1ml混 合 。37℃ 、6O分 钟 反 应 后 ,18Omin倒转 ,根 据 凝 胶 形 成 的情 况 判 定 的一种半定 量法。此法操作 比较简单 、经济 ,而且 不 需要 专用仪 器 。0.03-EU/ml的 范 围 内进 行 半定 量 测 定 。

 

                                                              2 浊 度 法   

根 据 内 毒 素 与 鲎试 剂 的 C 因 子 发 生 反 应 ,由 内 毒 素 引 发 激 活 的 凝 固 酶 ,切 断 凝 固 蛋 白原 中 的精 氨 酸 肽 链 ,形 成凝 固蛋 白从而产 生凝胶过 程 中的浊度变化 ,是用浊度仪定 量 的 方 法 ,此 法操 作 比 较 简 单 、经 济 ,灵敏 度 较 高 ,检 测 范 围 较 大 (0.006—300EU/m1)。根 据 测 定 原 理 的 不 同 又 可 分 为 终 点 法 (EndopointTurbidimetricMethod)和 动 态 法 (KineticTurbidi metricMethod)。终 点 浊 度 法 是 根 据 到 达 规 定 时 间 点 上 反 应 液 的 最 终 浊 度 值 与 细 菌 内毒 素 浓 度 成 比 例 的 关 系 的 一 种 检 测 方 法 。动 态 浊 度 法 是 根 据 测 定 到 达 事 先 设 定 的 反 应 液 的 浊度 变 化 所 需 要 的 时 间 的对 数 值 与 细 菌 内毒 素 浓 度 的 对 数 值 成 反 比例 关 系 的 一种 分 析 方 法 。本 方 法 因 有 配 套 仪 器 而 较 为 广 泛 地 应 用 于 药物 检 测 及 临 床 。

 

                                                             3 比 色 法  

根 据 被 测 内毒 素激 活 的 凝 固酶 水 解 外 加 鲎 三 肽 (如 :B0C—IEU—GIY—ARG-PNA 等 )中 的 精 氨 酸 肽 链 ,释 放 出 黄 色 的对 硝 基 苯 胺 (PNA),用 冰 醋 酸 终 止 反 应 进 行 吸 光 度 测 定 ,或 用 游 离 的 PNA 和 偶 氮 试 剂 反 应 ,最 终 形 成 红 色 的 偶 氯 蓝 复 合 物 而进 行检 测 的 一 种 方 法 。它 也 分 为终 点 法 和 动 力 学 法 。此 法 操 作 较 复 杂 ,但 灵 敏 度 和 精 密 度 都 较 高 ,目前 也 较 为 常 用 。
   

                                                     4 酶 联 免疫 吸 附 测 定 法 

主 要是 利 用 内 毒 素 作 为外 源 性 致 热 原 的 生 物 学 活 性 ,通 过 对 内毒 素刺 激 巨噬 细 胞 后 产 生 的 内源 性 致 热 原 (如 TNF,IL一1等 )进 行 检 测 ,从 而 对 内毒 素进 行定 量检 测 。
 

                                                  5 流 式 细 胞 术(flow cytometry)

是 应 用 针 对 内 毒 素 表 面抗 原 决 定 簇 的 单 克 隆抗 体 (如 抗 LPS单 克 隆 抗 体 )对 内毒 素 进 行 荧 光 标 定 而 后 应 用 流 式 细 胞 仪 进 行 检 测 的 一 种 方 法 。本 方 法 不 同于 其 它 方 法 之 处 在 于 它 所 测 定 的 是 内 毒 素 的 量 而 不 是 活 性 。

   

                                                   6 化学发光测定法

应用 CR1 和 CR3受 体 诱 导 中性 粒 细 胞 的 氧 化 反 应 作 为 一 个 反 应 平 台 , 通过 测定 内毒素对 中性 粒细胞 的 生物学作 用来 检测 内毒素 的水平 。

 

 

内毒素检测产品信息

品牌             

产品名称

     描述

包装

安度斯

鲎试剂

0.03EU/mL凝胶法鲎试剂

0.1mL/

安度斯

细菌内毒素工作标准品

10EU/支 细菌内毒素工作标准品(安度斯制备)

10/

安度斯

内毒素检查用水

5mL/支 内毒素检查用水

10/

 

订购信息

品牌                            货号                                   

LONZA                        N289-06                

LONZA                        N289-125

LONZA                        N289-25

LONZA                        N594-03

LONZA              N594-06

LONZA                       N594-125

 

 

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