1.核心通用原则
所有样本采集后需2小时内完成前处理，避免补体系统在体外继续激活，导致过敏毒素C3a/C4a/C5a浓度假性升高；全程避免样本反复冻融，冻融次数超过3次会使检测结果偏差超过20%。
严禁向样本中添加叠氮钠（NaN₃），该成分会抑制试剂盒中辣根过氧化物酶（HRP）活性，直接导致检测失效。
2.不同类型样本专属处理流程
血清样本
用无热原、无内毒素的采血管采集全血，室温自然凝固10~20分钟
4℃条件下3000rpm离心20分钟，小心吸取上层清亮血清，避免触碰下层血细胞
若样本放置后出现沉淀，需再次4℃离心15分钟后取上清检测
血浆样本
根据实验需求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，严禁使用肝素钠抗凝（易引发非特异性补体激活）
采血后立即轻柔颠倒混匀10~20次，室温静置20分钟
4℃条件下3000rpm离心20分钟，分离上层血浆，全程避免溶血
组织样本
新鲜离体组织用预冷PBS（pH7.2~7.4）冲洗3次，去除表面残留血液
按1:9的重量体积比加入预冷PBS，临用前添加足量蛋白酶抑制剂
冰水浴条件下充分匀浆，4℃条件下10000rpm离心20分钟，取上清待测
细胞培养上清/裂解液
培养上清：无菌收集后4℃3000rpm离心20分钟，去除细胞碎片取上清
细胞内样本：用预冷PBS洗涤细胞3次，调整细胞浓度至100万/mL，反复冻融3次充分裂解，4℃10000rpm离心20分钟取上清
3.样本保存与转运规范
短期1~2周内待检测：样本分装后置于-20℃密封保存，标注编号避免交叉污染
长期保存：转移至-80℃超低温冰箱，最长可稳定保存6个月，过敏毒素活性留存率≥90%
低温转运：全程使用干冰保温箱，避免样本中途解冻；到达实验室后立即转入对应温度冰箱
4.不合格样本判定与预处理
溶血样本：血红蛋白浓度超过5g/L时直接弃用，溶血会引发非特异性补体激活，结果失真
高血脂/脂血样本：4℃12000rpm高速离心30分钟，去除上层脂层后再检测，否则会干扰酶标板抗原抗体结合
浑浊沉淀样本：4℃10000rpm再次离心15分钟，取清亮上清检测，仍有沉淀的样本直接弃用
