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细胞转染之PEI转染法

点击次数:127  发布时间:2020-08-24

实验专栏---PEI 细胞转染

      阳离子聚合物 - 聚乙烯亚胺(PEI)是目前报道的工业化、大规模瞬时转染表达重组蛋白领域使用的基因载体和转染试剂。人胚胎肾细胞(HEK293)和中国仓鼠卵巢细胞(CHO)细胞是目前工业大规模瞬时转染领域使用的宿主细胞。PEI 是基因载体中的阳离子聚合物之 一,因为其具有高的转染效率,所以作为基因转染的黄金标准而常被用来参照。 PEI 形成复合物的分子量通常在 5 ~ 25 kDa之间。高分子量 PEI 一般比低分子量 PEI 有 更高转染效率,但问题在于,高分子量的 PEI 往往有 较高的细胞毒性, 这一规律与其他聚阳离子类似。目前主要有三种主流方法:生物转染,物理转染和化学转染。化学转染方法是生物医学研究中转染方法,主要包括两类:阳离子脂质体和阳离子聚合物。其基本原理是利用阳离子的化学分子与带有负电荷的核酸通过正负电荷作用形成稳定的复合物。

 

PEI转染机制

目前使用的阳离子聚合物转染试剂是 PEI。PEI 制备简单,价格便宜,有线状和枝状两种商业试剂可选,是瞬时转染放大转染试剂的不二选择,是非常有潜力的非病毒质粒载体试剂。
由于PEI 带正电荷,与带负电荷的DNA 结合形成带正电荷的 PEI-DNA 复合物,可以与带负电荷的细胞表面结合。PEI-DNA 复合物通过胞吞作用进入细胞内部形成内涵体,之后一部分从内涵体中逃逸进入细胞核内,未逃逸的进入溶酶体被降解,无法入核的 DNA 会在 100 min 内被胞浆中的 DNA 酶降解。

 

 

PEI转染过程

 


1. 细胞培养

293T 细胞培养于 DMEM[含 10%胎牛血清(FBS)中],置于 37 ℃、5%CO2 条件下连续培养,转染前24h 将细胞接种于6孔板中,每孔 5×105 个细胞且均匀分布,用于转染.

2.293T 细胞转染

取 6 孔板细胞,PBS 缓冲液洗涤两次,转染组细胞分别加入脂质体转染混合和 PEI 转染混合液,对照组加 入 等 量 无 血 清 DMEM,边 加 边 混 匀,37 ℃,5%CO2 培养 6 h。转染后去除转染混合液,每孔加入完全培养基2 mL 继续培养,48 h 后检测转染效果。

3. 细胞活性检测

采用 CCK-8 试剂盒进行检测

4. 转染后绿色荧光观察及监测表达

在荧光显微镜下观察转染48h后带有绿色荧光的细胞比例,有绿色荧光说明转染成功。

 

 

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