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PeproTech细胞因子常见问题解答

点击次数:58  发布时间:2020-12-24

 PeproTech研制出的无动物成分的重组蛋白(animal-free recombinant proteins),是利用专有的无动物成分生产设施,在严格的无动物成分条件下生产出来,因此痕量的动物源性污染引发潜在问题的可能性被降至低,从而完全达到临床前研究和细胞治疗用标准。PeproTech研发无动物成分的培养基添加物试剂盒(animal-free Media Supplement Kits)。这些试剂盒经改良设计,其中的无血清组分对多种哺乳动物细胞的生长有更好的维持能力。

 

质的RUO细胞因子

        全长和完全生物活性的RUO细胞因子是由我们经验丰富的蛋白质科学家内部开发的。该过程从我们的分子生物学实验室开始,进行基因设计和表达,然后到细胞银行,进行发酵/细胞培养,纯化,最终进行QC测试。

大肠杆菌(E.coli)表达蛋白:

PeproTech拥有超过15,000平方英尺的发酵,蛋白质加工和净化设备,能够满足客户的需求。

细胞培养表达蛋白:

PeproTech拥有先进的细胞培养和蛋白质纯化设备,能够提供糖基化的完全生物活性蛋白。

 

 

常见问题 - RUO细胞因子

每个产品的相关信息均在该产品随附的CoA(说明书)中,请仔细阅读这些信息,以获知溶解和存储的方法。

 

1. 你们的蛋白产品的稳定性如何? 

除非在产品说明书中特别注明,我们的所有产品均为冻干粉,在室温条件下非常稳定。尽管如此,我们还是建议您将冻干产品保存在-20oC至-80oC。对于大多数产品,重悬后在4oC仅能短期保存。如想长期保存,请用含载体蛋白(如0.1% BSA)的溶液稀释已重悬的蛋白,然后分装、冻存于-20oC至-80oC。分装浓度要求不低于1 µg/ml,每管体积要求不小于10µl。务必注意,请避免反复冻融,因每次冻融均可能引起蛋白的部分变性。因此,我们建议分装的蛋白溶液冻融不要超过1次。

 

2. PeproTech重组蛋白的内毒素水平如何?

PeproTech大部分无动物成分级别蛋白的内毒素水平均保证低于0.01 ng/µg蛋白,即0.1 EU/µg蛋白。对于大多数非无动物成分级别的蛋白,内毒素水平保证低于0.1 ng/µg蛋白,即1 EU/µg。其实,许多蛋白的实际内毒素含量均低于上面标称的内毒素水平,具体信息请与我们的质量保证(QA)部门联系。

 

3. 为什么我在管中看不到蛋白团块?

与市场上的许多蛋白产品不同,PeproTech的产品中不含任何载体蛋白和其它添加物 (如BSA, HSA和蔗糖等),并且常在含盐量的溶液中冻干,结果是微量的蛋白在冻干过程中会沉积在管壁上,形成蛋白薄膜,有时肉眼观察不到。我们建议,在打开管盖前用小离心机快速离心20-30秒,使附着在管盖或管壁上的蛋白团块聚集于管底。尽管可能看不到蛋白团块,但我们的质控程序保证每管中的蛋白含量准确无误。

 

4. 哪些细胞因子有种属交叉活性?

除少数例外,大多数人细胞因子对小鼠细胞均有活性,很多小鼠细胞因子也可作用于人,但反应的特异性可能低于对应的人细胞因子。IL-7等为数不多的人细胞因子作用于小鼠细胞时,甚至比对应的小鼠细胞因子活性还强。干扰素,GM-CSF, IL-3和IL-4等细胞因子的种属特异性很强,与其它种属细胞的交叉反应活性非常弱。相反,成纤维细胞生长因子(FGF)和神经营养素(neurotrophins)等高度保守,在不同动物种属细胞上均呈现良好的生物学活性。

 

5. ED50和units/mg均用来表示比活性(specific activity),两者之间有什么关联?

ED50的定义是可诱导50%最大反应的细胞因子浓度,而比活性(specific activity)是单位重量蛋白样品中所含的活性单位。比活性单位(Specific Activity Units)只能用于表示蛋白的效能,且仅适用于剂量反应曲线为S形的蛋白。

 

6. 比活性单位(specific activity units)和活性的国际单位(International Units)之间有什么关联?比活性单位和国际单位(IU)之间没有直接的关联,不能相互换算。

国际单位(IU)是与国际标准品的活性单位(即IU/ng)比对后得出的活性数值,后者是在世界卫生组织(WHO)领导的国际合作研究中确定的。WHO国际标准品由英国国家生物制品检定所(NIBSC)制备和提供。

简单地与国际标准品比对而得出的蛋白活性国际单位(IU)常会出现偏差,原因是每个蛋白厂家所用的活性检测方法很难一致,从而导致与国际标准品比对后得到的国际单位(IU)值相互间不具可比性。想要实现真正的可比性,必须建立标准的活性检测方法,以保证所得出的蛋白活性国际单位(IU)值仅与蛋白的质量有关,而与蛋白的来源无关。

 

7. PeproTech是怎样得到蛋白活性的国际单位(IU)值的?

在可能的情况下,PeproTech通过将自己的产品与对应的WHO标准品在自已的生物活性测试中进行多次平行比对来得出国际单位(IU)值。多次对比可保证我们能够排除因测试本身的不稳定性(如产品批次,使用方法和测试方案等的变异性)而导致的异常值的出现。经多次比对得出的结果可对我们产品的国际单位(IU)值进行可靠的定量。

 

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